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本生生物解析人ELISA Kit具体操作步骤

本生(天津)健康科技有限公司   发布时间:2020/7/29 16:28:18


本生生物解析人ELISA Kit具体操作步骤

  人ELISA Kit又称人白介素elisa试剂盒,主要应用于双抗体夹心法测定标本中人白介素水平,用纯化的人白介素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素,再与HRP标记的白介素抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白介素含量。

  人ELISA Kit白介素试验步骤分析:

  1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

  4、配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。

  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7、温育:操作同3。

  8、洗涤:操作同5。

  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.

  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11、测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

  人ELISA Kit白介素实验要求:

  1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2、不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

阅读人数:21 原创作者:本生(天津)健康科技有限公司

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