BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书(微板法 96 样)

　　一、产品简介：

　　BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单，快速，耐去污剂(多 5%)的检测蛋白质浓度 的方法。由于蛋白质能将 Cu 2+还原成 Cu +;BCA 可与 Cu +结合生成紫蓝色复合物，在 562nm 处有大光吸光值，颜色的深浅与蛋白含量成正比，因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。

　　二、试剂盒组分与配制:

　　试剂名称

　　规格

　　保存要求

　　备注

　　试剂 A

　　液体 25mL×1 瓶

　　4℃保存

　　依据实验用量，临用试剂

　　A:B=50:1 的比例混匀成反应 mix

　　试剂 B

　　液体 0.5mL×1 支

　　4℃保存

　　标准品

　　液体 1.5mL×1 支

　　4℃保存

　　若重新做标曲，则用到该试剂

　　三、所需的仪器和用品：

　　酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温水浴锅、移液器和蒸馏水。

　　四、蛋白含量测定：

　　建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费!

　　1、样本制备：

　　(1)组织样本：

　　称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液(提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水) 冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。

　　【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实

　　验可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 (2)细菌或细胞样本：

　　先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液; 超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次)， 12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。

　　【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实 验可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。

　　(3)液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。

　　2、上机检测

　　(1)酶标仪预热 30min，调节波长到 562 nm。(2)反应 mix 置于 60℃水浴预热 30 min(仅煮一次即可)。

　　试剂名称(μL)测定管空白管(只做一次)样本5蒸馏水5反应 mix200200混匀，于 60℃保温 30min，全部转移到 96 孔板， 于 562nm 处测定吸光值 A，△A= A 测定-A 空白。

　　【注】：若△A﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定。本试剂盒仅供科研使用

　　五、结果计算：

　　1、标准曲线方程：y = 0.188x - 0.0046;x 是标准品质量(

　　μg)，y 是△A。

　　2、Cpr (mg/g 鲜重)= [(△A+0.0046)÷0.188×10 -3]÷(V1÷V×W) ×D

　　=1.06×(△A+0.0046) ÷W×D

　　3、Cpr (mg/mL)=[ (△A+0.0046)÷0.188×10 -3]÷V1×D=1.06×(△A+0.0046)×D

　　4、Cpr (μg/10 4 cell))=[ (△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=2.13×(△A+0.0006)×D

　　V－－－－提取液体积：1mL;

　　V1－－－－加入粗提液体积：0.005mL;

　　W－－－－样本质量：g;

　　D－－－－稀释倍数;

　　500－－-细菌或细胞总数，500 万。

　　附：标准曲线制作过程：

　　1 标准品母液(500μg/mL)。

　　2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,100, 200, 300, 400, 500. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。

　　3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

　　BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。