BUNSEN本生分享：ELISA试验中常见问题原因分析

　　一、ELISA试验中结果显色淡、灵敏度品低的原因。

　　1、移液的样品吸量不足，移液时抽吸、排放太快，移液嘴内壁挂液太多货内壁不清洁，造成加样量不准。

　　2、恒温箱温度不是37℃(或43℃)，或多块反应板重叠放置造成板孔内的实际温度偏差，使抗原、抗体复合物形成过少。

　　3、保温时间不足，抗原、抗体反应不

　　4、显色剂加入量不足。

　　5、显色液的A、B液比例不对。

　　6、洗涤时冲击力过大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加，导致已形成的抗原、抗体复合物洗脱。

　　7、底物反应的温度不够，时间不足。

　　8、试剂盒在运输、保存期间放置的温度太高、时间过长，造成抗原、抗体效价下降，酶的活力降低。

　　9、试剂盒已超出保存有效期，抗原、抗体效价下降，酶活力降低。
 

　　二、ELISA试验中结果出现白板、阳性对照不显色的原因

　　1、洗涤液配制有误。

　　2、终止液误作为浓缩洗涤液或酶结合物稀释液使用。

　　3、漏加酶结合物，物价酶结合物或在酶标二抗的试验中实验顺序错误。

　　4、终止液当做底物缓冲液使用

　　5、配制溶液中残留了解灭火酶活力的物质。

　　6、底物中未加OPD或TMB。

　　7、运输、贮存不当，导致没活力丧失。

　　8、底物液中未加过氧化氢或放置过久过氧化氢失效。

　　三、而莉萨是严重结果全部显色的原因

　　1、酶结合物的浓度过大

　　2、恒温箱温度较高，酶结合物光片时间或底物显色时间过长。

　　3、洗涤不充分，样品中有其他成分残留或酶结合物残留。

　　4、底物配置时间过久，底物受光照射时间较长或被污染。

　　5、整批样品放置时间过长被污染或生长细菌。

　　6、一夜醉从复使用时，未清洗干净或消毒不。

　　7、配制溶液的水质有问题。

　　四、ELISA试验中结果阴、样对照显色差距较小的原因

　　1、稀释不准。加样量不准。

　　2、加样时个空军被污染

　　3、底物不新鲜，配制时间较长或被污染。

　　4、试剂效价下降或超过了试剂的有效使用期。

　　5、配制溶液的水质有问题

　　五、ELISA试验中结果重复性不好的原因

　　1、样品加入量多少不一，加样时间又长又短。

　　2、样品加入后为充分混合均匀。

　　3、移液加样器加样量不一致。

　　4、酶标仪滤光片不对。

　　5、操作过程中个别反应孔中液体外溅。

　　6、不同批号试剂混用。

　　7、瓶盖交叉使用

　　8、温育条件和保温时间不一致。

　　9、洗涤条件不一致。

　　10、显色条件和时间不一致。

　　11、边缘效应，导致周边孔(尤为4个较)较中央孔显色为深。

　　12、将酶结合物或底物溶液加载了孔壁上，并有残留。

　　13、酶结合物充分混匀就加入反应孔中。

　　14、多加或少加了酶结合物、底物。

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